于2016年4月12日下午15時(shí)，酶聯(lián)免疫學(xué)第三方檢測(cè)中心(上海恒遠(yuǎn)生物)首屆細(xì)胞培養(yǎng)在線問答活動(dòng)于本成功開放，不少用戶熱情參與，向我司技術(shù)提出問題。當(dāng)時(shí)下午17時(shí)整，時(shí)長(zhǎng)兩個(gè)小時(shí)的網(wǎng)絡(luò)在線技術(shù)問答活動(dòng)已截止。下面是常見問答內(nèi)容公布，希望對(duì)您的實(shí)驗(yàn)帶來(lái)幫助：
1.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基？ 
  不能。每一細(xì)胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細(xì)胞培養(yǎng)基， 若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基， 細(xì)胞大都無(wú)法立即適應(yīng)， 造成細(xì)胞無(wú)法存活。 

2.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之血清種類？ 
  不能。血清是細(xì)胞培養(yǎng)上一個(gè)極為重要的營(yíng)養(yǎng)來(lái)源，所以血清的種類和品質(zhì)對(duì)于細(xì)胞的生長(zhǎng)會(huì)產(chǎn)生極大的影響。來(lái)自不同物種的血清， 在一些物質(zhì)或分子的量或內(nèi)容物上都有所不同，血清使用錯(cuò)誤常會(huì)造成細(xì)胞無(wú)法存活。 

3.如何選用特殊細(xì)胞系培養(yǎng)基？ 
  培養(yǎng)某一類型細(xì)胞沒有固定的培養(yǎng)條件。在MEM中培養(yǎng)的細(xì)胞，很可能在DMEM或M199中同樣很容易生長(zhǎng)?？傊?，MEM做粘附細(xì)胞培養(yǎng)、RPMI-1640做懸浮細(xì)胞培養(yǎng)是一個(gè)好的開始。 

4.何時(shí)須更換培養(yǎng)基？ 
  視細(xì)胞生長(zhǎng)密度而定，或遵照細(xì)胞株基本數(shù)據(jù)上之更換時(shí)間，按時(shí)更換培養(yǎng)基即可。 

5.細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍，可否繼續(xù)使用？ 
  如果細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍，您應(yīng)該熔化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生，培養(yǎng)基可以正常使用，如果出現(xiàn)沉淀，只能丟棄這些培養(yǎng)基。 

6.無(wú)血清培養(yǎng)與有血清培養(yǎng)使用的抗生素量一樣嗎？ 
  當(dāng)在無(wú)血清培養(yǎng)基中添加抗生素時(shí)，降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會(huì)結(jié)合和滅活一些抗生素。在無(wú)血清培養(yǎng)條件下，抗生素不被滅活，可能對(duì)于細(xì)胞達(dá)到毒性水平。 

7.培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后，可長(zhǎng)期保存嗎？ 
  一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時(shí)，您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因?yàn)橐恍┛股睾脱逯械幕境煞衷诮鈨龊缶烷_始降解。 

8.培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復(fù)凍融嗎？ 
  大部分添加物和試劑zui多可以凍融3次，如果次數(shù)更多都會(huì)在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀，將會(huì)影響它的性能。 

9.為什么要在溶解的一周內(nèi)使用貯存在4℃冰箱中的液體胰蛋白酶溶液？
  胰蛋白酶在4℃就可能開始降解，如果在室溫下放置超過30分鐘，就會(huì)變得不穩(wěn)定

10.DMSO之等級(jí)和無(wú)菌過濾之方式為何？ 
   冷凍保存使用之DMSO 等級(jí)， 必須為Tissue culture grade之DMSO (如Sigma D2650)， 其本身即為無(wú)菌狀況， *次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中， 保存于4°C， 避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO 之裂解而釋出有害物質(zhì)， 并可減少污染之機(jī)會(huì)。若要過濾DMSO， 則須使用耐DMSO 之Nylon 材質(zhì)濾膜。 

11.冷凍保存細(xì)胞之方法？ 
   方法一：冷凍管置于4℃ 30~60分鐘→(-20℃ 30分鐘)→-80℃ 16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽vaporphase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。 
   方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。-20℃不可超過1小時(shí)，以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，惟存活率稍微降低一些。 

12.支原體污染會(huì)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)有何影響？ 
   支原體污染幾乎可影響所有細(xì)胞之生長(zhǎng)參數(shù)， 代謝及研究之任一數(shù)據(jù)。故進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前，必須確認(rèn)細(xì)胞為mycoplasma-free，實(shí)驗(yàn)結(jié)果之?dāng)?shù)據(jù)方有意義。 

13.偵測(cè)出細(xì)胞株有支原體污染時(shí)，該如何處理？ 
   直接滅菌后丟棄，以避免污染其它細(xì)胞株。 

14.為何培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中，顏色會(huì)偏暗紅色，且pH值會(huì)越來(lái)越偏堿性？ 
   培養(yǎng)基保存于4℃冰箱中，培養(yǎng)基內(nèi)之CO2會(huì)逐漸溢出，造成培養(yǎng)基越來(lái)越偏堿性。而培養(yǎng)基中之酸堿指示劑(通常為phenol red)的顏色也會(huì)隨堿性增加而更偏暗紅。培養(yǎng)基偏堿之結(jié)果，將造成細(xì)胞生長(zhǎng)停滯或死亡。若培養(yǎng)基偏堿時(shí)，可以通入無(wú)菌過濾之CO2，以調(diào)整pH值。

15.細(xì)胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何？ 
   動(dòng)物細(xì)胞冷凍保存時(shí)zui常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5-10% DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原來(lái)細(xì)胞生長(zhǎng)用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意：由于DMSO稀釋時(shí)會(huì)放出大量熱能， 故不可將DMSO直接加入細(xì)胞液中， 必須使用前先行配制完成。 

16.培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)應(yīng)使用5%或10%CO2？或根本沒有影響？ 
   一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3-/CO32-/H+作為pH的緩沖系統(tǒng)，而培養(yǎng)基中NaHCO3的含量將決定細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用的CO2濃度。當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3含量為每公升3.7g時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)應(yīng)使用10%CO2；當(dāng)培養(yǎng)基中NaHCO3為每公升1.5g時(shí)，則應(yīng)使用5%CO2培養(yǎng)細(xì)胞。 
  
17.培養(yǎng)基中是否須添加抗生素？ 
   除于特殊篩選系統(tǒng)中外，一般正常培養(yǎng)狀態(tài)下， 培養(yǎng)基中不應(yīng)添加任何抗生素。 

    以上這些有幫助到您嗎？不久后，我司會(huì)陸續(xù)推出培養(yǎng)基、血清、ELISA試劑盒的在線問答活動(dòng)，期待大家熱情參與。