大家都知道影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素有很多，今天上海恒遠(yuǎn)為大家分享影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果的其中一種因素——酶結(jié)合物！

    在ELISA實(shí)驗(yàn)中，用酶標(biāo)記的抗體或抗原統(tǒng)稱(chēng)為結(jié)合物，此為進(jìn)行ELISA檢測(cè)的關(guān)鍵試劑。常規(guī)使用ELISA法的主要問(wèn)題是能夠簡(jiǎn)便地制備酶結(jié)合物，而此種制備好的酶結(jié)合物要求穩(wěn)定，具有很高的酶活性，抗原或抗體的特異性，產(chǎn)量高及成本低。

    用什么樣的酶來(lái)標(biāo)記抗原或抗體呢？可根據(jù)以下幾點(diǎn)來(lái)選擇適當(dāng)?shù)拿浮?br />    1、酶制品的純度及活力高，催化效力也高，放大倍數(shù)大（即一個(gè)酶分子能催化幾十幾百個(gè)底物分子發(fā)生反應(yīng)的酶）。
    2、酶及制備好的酶結(jié)合物在檢測(cè)或貯存中能保持穩(wěn)定。
    3、酶制劑易得、價(jià)廉.
    4、既要適用于標(biāo)記抗原，又適用于標(biāo)記抗體，標(biāo)記后不影響抗原或抗體的免疫學(xué)特性，也不降低酶的活性。
    5、酶的反應(yīng)產(chǎn)物穩(wěn)定，檢測(cè)時(shí)簡(jiǎn)便、快速。在定量測(cè)定中產(chǎn)物必須是可溶性的。
    6、要有安全、價(jià)廉、易得的底物。

    符合上述條件的酶有：堿性磷酸酶，一般用分子量為5×105（Alkaline Phospatase,簡(jiǎn)稱(chēng)AP），辣根過(guò)氧化物酶（Horse Radish Peroxidase,簡(jiǎn)稱(chēng)HRP,分子量為4×104）,另外尚有葡萄糖氧化酶，β-半乳糖甙酶，糖化酶及乙酰膽堿酯酶等等。其中以前兩種（AP和HRP）zui為常用。
    AP活力高，制備好的酶結(jié)合物可加NaN3防腐，但此種酶不易獲得，因其是從小牛腸粘膜中或大腸桿菌中提取，而且價(jià)格比較昂貴。因此，目前國(guó)內(nèi)外大多使用HRP。HRP活性也高，價(jià)格較便宜。但制得酶結(jié)合物不能加NaN3防腐。因NaN3能抑制HRP的活性，但可作低溫保存或加60%緩沖甘油等量混合后少量分裝，保存冰箱，一般可用1-2年。

    由于HRPzui為常用，故先把HRP的一般性質(zhì)介紹一下，以便在制備酶結(jié)合物時(shí)可引起注意。
(HRP的性質(zhì)):HRP系從辣根菜的根中所提取，這種酶是無(wú)色酶蛋白與暗棕色的鐵卟啉（E鐵血素）相結(jié)合的一種醣蛋白，可簡(jiǎn)寫(xiě)成由多個(gè)（6-7個(gè)）同功 酶所組成。分子量約為40000，等電點(diǎn)為PH7.2。能被58-62%飽和硫酸銨沉淀，在PH3.5-12均較穩(wěn)定。63℃15分鐘，室溫?cái)?shù)周、甲苯和其他苯類(lèi)有機(jī)溶劑處理都不影響它的活性。